Formación en línea

En la página de acceso a los laboratorios virtuales de Biomodel, iremos al final de todo de la página o bien pulsamos sobre el recuadro "Cromatografía" (no sobre la puerta del "lab 8" que nos lleva solo a la cromatografía en columna).

Allí elegimos la opción "Cromatografía en capa fina para análisis de mezclas de aminoácidos o lípidos" y entramos a cualquiera de las dos versiones: aminoácidos o lípidos.

Si la práctica se realiza con alumnado de niveles superiores, se les puede pedir que realicen una investigación previa sobre las características de cada uno de los aminoácidos/lípidos, para saber si serán más afines a la fase móvil o a la fase estacionaria y así poder hacer una hipótesis sobre cuál de ellos subirá más en la capa fina. Si la hacemos con niveles inferiores, simplemente para ilustrar la técnica, podemos empezar directamente explicando cómo funciona el proceso.

Una vez entramos en cualquiera de los laboratorios, encontraremos los mismos elementos: 

En una cromatografía en capa fina, primero sembramos las mezclas que deseamos separar, disueltas en un disolvente. Dejamos evaporar el disolvente e introducimos la placa en una cubeta con el eluyente adecuado para que se separen las sustancias de la mezcla. Finalmente, debemos revelar la placa para poder observar las sustancias, en caso de que no presenten color natural. Para ello, seguiremos el siguiente procedimiento:

1. Tomamos el capilar que aparece en la parte superior izquierda, es importante cogerlo de la zona inferior, clicando sobre él y arrastrándolo sin soltarlo.
2. Lo introducimos dentro de uno de los tubos y soltamos. El capilar se introduce en la disolución, que sube por su interior por capilaridad. 
3. Volvemos a coger el capilar, ya cargado, de la parte inferior y lo arrastramos hasta la placa. lo ponemos sobre uno de los puntos y soltamos. El líquido será absorbido por la fase estacionaria.
4. Una vez depositada la muestra sobre la placa, desechamos el capilar en el cubo de reciclaje situado a la derecha. Es importante este paso, porque hasta que no lo hagamos no aparecerá otro capilar. Esto nos recuerda que no podemos utilizar el mismo capilar para disoluciones diferentes. para evitar contaminaciones cruzadas. 

Repetiremos el procedimiento hasta que hayamos depositado todas las disoluciones en la placa. Si nos cuesta encontrar la posición, podemos activar la casilla que aparece debajo del recuadro (5), para que aparezcan marcas visuales que sirvan de orientación.

A continuación, pasaremos a la etapa de elución introduciendo la placa en la cubeta. Para ello, simplemente clicaremos sobre la flecha a la derecha del recuadro.

La placa se introduce sola dentro de la cubeta y la fase móvil comienza a subir por capilaridad, solamente deberemos tener cuidado de pasar a la etapa siguiente (clicando sobre la flecha de la derecha), antes de que el líquido llegue al extremo superior.

En la última etapa, pasaremos al revelado de la placa para poder observar las sustancias ya separadas, en esta etapa es donde difiere el procedimiento según estemos separando aminoácidos o lípidos.

Los aminoácidos se revelan con Ninhidrina 0.2% disuelta en etanol, para ello clicamos sobre el bote, lo arrastramos sobre la placa y soltamos.

La ninhidrina reacciona con los aminoácidos para dar una sustancia con color entre azul y violeta intenso, que nos revelará la posición de las diferentes manchas en la placa. Comparando la posición que han alcanzado los aminoácidos conocidos, con los de la mezcla de muestra, podremos saber qué aminoácidos contenía.

Los lípidos se revelan con vapores de yodo, para ello clicamos sobre el bote que se abre y se forman vapores sobre la placa, volvemos a clicar para cerrarlo y que se despejen.

El yodo interacciona con los lípidos dando una coloración entre marrón y amarillo, que nos revelará la posición de las diferentes manchas en la placa. Comparando la posición que han alcanzado los lípidos conocidos, con los de la mezcla de muestra, podremos saber qué lípidos contenía.

Una vez hayamos concluido la cromatografía, podemos tomar imágenes para incluirlas en la memoria de laboratorio. Para ello, clicamos sobre la cámara que aparece en la parte superior. Se abre una pequeña ventana con la imagen de la placa revelada y poniéndonos sobre ella con el ratón pulsamos el botón derecho y elegimos "Copiar imagen" (después la podemos pegar en un procesador de textos) o "Guardar imagen como..." (le damos nombre y elegimos la carpeta de destino).